实验并非总是一帆风顺的,我在听取小组组会时,了解到了上一个项目选取菌株与构建质粒的工作完成度非常高,成功在大肠杆菌中合成质粒并导入酵母。质粒成功整合到了酵母基因组中,自主复制、转录、翻译与表达颇为顺利,其蛋白表达量却始终距离我们理想的表达水平差之甚远。经过多步严谨的论证,认为是在翻译后修饰这一步骤中,目的蛋白被打上了糖基化标签,从而被水解酶水解,无法完成正常表达与分泌。至今这一问题尚在解决中。当然,我无法透露具体的菌株类型、表达蛋白名称。
实验的过程就是如此波折,千辛万苦地坚持了下来,却时时有可能在不经意的某一步功亏一篑。
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