PCR反应体系中核心组分的常规使用浓度范围及浓度异常的影响如下，适用于20-50μL标准反应体系。
一、核心组分常规浓度范围
组分 常规浓度范围（20-50μL体系）
DNA聚合酶 0.5-2U（如Taq酶，通常1U）
dNTPs（混合） 0.1-0.5mmol/L（单种dNTP浓度）
引物（上游/下游） 0.1-1μmol/L（每种引物浓度）
Mg²⁺ 1.5-2.5mmol/L（Taq酶最适）
模板DNA 10-100ng（基因组DNA）；1-10ng（质粒/PCR产物）
缓冲液（10×） 1×终浓度（含Tris-HCl、KCl等）
二、浓度偏高/偏低的影响
1. DNA聚合酶
- 偏高：非特异性扩增增加（酶过量导致错配结合）、引物二聚体增多、反应成本升高。
- 偏低：扩增效率下降，目的条带亮度弱甚至无产物（酶量不足无法完成循环延伸）。
2. dNTPs
- 偏高：抑制DNA聚合酶活性（过量dNTPs竞争结合位点）、增加碱基错配率、导致非特异性条带。
- 偏低：反应早期dNTPs耗尽，目的条带亮度低（无法支持大量产物合成）。
3. 引物
- 偏高：引物二聚体大量形成（引物间互补结合）、非特异性扩增增强、目的产物占比降低。
- 偏低：扩增效率低，目的条带弱（引物不足无法与模板充分结合）。
4. Mg²⁺
- 偏高：稳定非特异性引物-模板结合，非特异性条带增多、引物二聚体增加。
- 偏低：DNA聚合酶活性显著下降（Mg²⁺是酶的辅酶），无产物或产物量极少。
5. 模板DNA
- 偏高：杂质（如蛋白质、抑制剂）同步增多，抑制酶活性；非特异性扩增风险升高。
- 偏低：模板量不足，目的条带弱或无（尤其复杂基因组模板，易被非特异性扩增掩盖）。
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